Những lưu ý khi sử dụng Tủ an toàn sinh học

Trước khi sử dụng

• Bật quạt và đèn; cho tủ chạy khoảng 2-3 phút trước khi sử dụng để làm sạch không khí tù đọng bên trong tủ BSC
• Đảm bảo khung cửa sổ ở độ cao hoạt động phù hợp (thường là 8 hoặc 10 inch theo hướng dẫn của nhà sản xuất)
• Theo dõi báo động, đồng hồ đo áp suất hoặc chỉ báo lưu lượng để biết bất kỳ biến động lớn nào; một mảnh khăn giấy hoặc Kimwipe được giữ ở cửa mở là một thử nghiệm nhanh để đảm bảo tủ có luồng không khí thích hợp (khăn giấy nên được kéo vào trong)
• Tránh mang da hở vào buồng – găng tay phải được nhét bên dưới cổ tay áo khoác phòng thí nghiệm của bạn hoặc áo khoác phòng thí nghiệm của bạn nên được nhét bên dưới cổ tay của găng tay (tùy theo sở thích của bạn)
• Xịt chất khử trùng thích hợp lên khăn giấy và lau bề mặt tủ từ sau ra trước (từ sạch đến bẩn); một công cụ như tay cầm nhanh hơn có thể được sử dụng cho những không gian khó tiếp cận – KHÔNG đặt đầu của bạn vào bên trong tủ
• Lau sạch tất cả các vật liệu bằng chất khử trùng (thường là 70% ethanol) trước khi đặt vào bên trong buồng để đảm bảo duy trì môi trường vô trùng
• Đảm bảo lưới phía sau và phía trước rõ ràng
• Thiết bị gần lưới phía sau phải cách lưới ít nhất 1 inch
• Không đặt bất cứ thứ gì lên các tấm lưới phía trước (chẳng hạn như sổ ghi chép trong phòng thí nghiệm hoặc quy trình)
• Trước khi sử dụng, hãy kiểm tra nhãn chứng nhận để đảm bảo tủ đã được chứng nhận trong vòng một năm qua; nếu chứng nhận đã hết hạn, không sử dụng tủ và thông báo cho đại diện EHS phòng thí nghiệm của bạn để lên lịch chứng nhận lại

Trong quá trình sử dụng

• Mang tất cả vật liệu vào buồng trước khi bắt đầu thí nghiệm và thực hiện thí nghiệm cách tấm lưới phía trước ít nhất 4-6 inch để đảm bảo ngăn chặn và luồng không khí một chiều tốt nhất.

Tránh phá vỡ bức màn không khí:

• Sử dụng các chuyển động chậm, có kiểm soát
• Nếu bạn phải mang đồ vật vào và ra khỏi buồng, di chuyển bằng cách di chuyển vào trong và ra ngoài
• Tránh di chuyển tay từ bên này sang bên kia
• Tránh giao thông khi làm việc trong tủ – bất kỳ ai đi ngang qua sẽ phá vỡ bức màn khí
• Chất thải nên được giữ bên trong tủ và chỉ được lấy ra khi kết thúc thí nghiệm – điều này tránh làm hỏng màn chắn khí thường xuyên.

 

Làm việc từ “sạch” đến “bẩn”:

• Phương tiện và dụng cụ thủy tinh “sạch” (vô trùng) được bảo quản ở một bên của tủ
• Thao tác được thực hiện ở trung tâm của tủ để tránh lây nhiễm chéo
• Khi vật liệu trở nên “bẩn” (bị nhiễm bẩn), nó sẽ được chuyển sang phía đối diện của tủ và được thu gom dưới dạng chất thải nguy hại sinh học
• Nếu cần, hãy sử dụng đường hút chân không được thiết lập phù hợp:
• Đặt bộ lọc kỵ nước* hoặc HEPA trước đường chân không; bộ lọc có hướng, vì vậy hãy đảm bảo bộ lọc đối diện với bình tràn
• Thêm một lượng chất khử trùng thích hợp vào bình sơ cấp để khử trùng thể tích chất lỏng cuối cùng – chất tẩy gia dụng pha loãng theo tỷ lệ 1:10 (v/v); thuốc tẩy nên được làm mới hàng tuần để đảm bảo hiệu quả khử trùng
• Nếu các bình nằm trên sàn, hãy đặt chúng vào một vật chứa thứ cấp chẳng hạn như thùng nhựa để chứa bất kỳ chất tràn nào nếu bình bị đổ
• Dán nhãn dán nguy hiểm sinh học lên bình thu gom sơ cấp hoặc bình chứa thứ cấp
• *Bộ lọc kỵ nước có sẵn thông qua VWR – mục #55095-006, 28137-858 hoặc 28137-737

Không sử dụng ngọn lửa trần trong tủ an toàn sinh học:

• Buồng là một môi trường vô trùng và không cần nguồn nhiệt để vô trùng
• Có sẵn các vòng/bộ rải dùng một lần hoặc có thể hấp tiệt trùng để thay thế việc khử trùng bằng ngọn lửa đối với các vòng kim loại hoặc bộ rải tấm kim loại/thủy tinh
• Nhiệt từ ngọn lửa trần sẽ phá vỡ các luồng không khí một chiều trong buồng và có thể dẫn đến nhiễm chéo mẫu
• Baker gần đây đã cung cấp dữ liệu thử nghiệm cho thấy khả năng nhiễm chéo mẫu do sử dụng nguồn nhiệt bên trong tủ an toàn sinh học
• Để biết thêm thông tin, hãy truy cập Baker BSC Mythbusters: https://bakerco.com/communication/bsc-mythbusters/
• Nhiệt có thể làm hỏng bộ lọc HEPA cung cấp
• Chính sách của CAB cấm sử dụng ngọn lửa trần ngoài các trường hợp đặc biệt (cần phải xem xét và phê duyệt trước của CAB)
• Các nguồn nhiệt khác trong BSC (chẳng hạn như lò đốt gốm) cần được CAB xem xét và phê duyệt trước
• Vui lòng xem phần Chính sách bên dưới để biết thêm chi tiết

Sau khi sử dụng

• Khi bạn hoàn tất, để quạt BSC chạy trong 2-3 phút để lọc hết không khí trong buồng
• Lau sạch vật liệu bằng chất khử trùng hóa học thích hợp và lấy mọi thứ ra khỏi tủ
• Lau sạch bề mặt tủ bằng chất khử trùng hóa học thích hợp làm việc từ khu vực sạch đến khu vực bẩn
• Tắt tủ, đóng cửa, cởi bỏ phương tiện bảo vệ cá nhân và rửa tay

Lưu ý về đèn UV:

• Đèn UV không phải là phương pháp khử trùng đáng tin cậy – khử trùng bằng hóa chất và sử dụng tủ đúng cách là đủ để duy trì tính vô trùng
• Không còn được khuyến nghị bởi Hiệp hội An toàn Sinh học Hoa Kỳ (ABSA International, 2000), NSF (2004) hoặc Trung tâm Kiểm soát Dịch bệnh (CDC, 2009)
• Không có tiêu chuẩn xác minh hiệu suất để kiểm tra hiệu quả khử trùng
• Bóng đèn có thời hạn sử dụng hạn chế
• Nghiên cứu cho thấy các phòng thí nghiệm không bảo dưỡng bóng đèn (thay bóng đèn 6 tháng một lần và lau hàng tuần để loại bỏ các hạt)
• Các tủ mới hơn không còn được chế tạo với đèn UV như một tùy chọn mặc định
• Vui lòng xem phần đèn UV để biết thêm thông tin cho các phòng thí nghiệm chọn sử dụng đèn UV

Chứng nhận và bảo trì

• Tủ an toàn sinh học phải được kiểm tra và chứng nhận hàng năm bởi một kỹ thuật viên được đào tạo. Phòng thí nghiệm và PI có trách nhiệm lên lịch dịch vụ này trước ngày hết hạn chứng nhận hiện tại. Ngoài ra, BSC nên được khử trùng và làm sạch trước và sau mỗi lần sử dụng. Trên cơ sở hàng năm hoặc nửa năm, bể chứa bên dưới bề mặt làm việc phải được làm sạch để tránh nhiễm bẩn:

Giấy chứng nhận

• Viện Y tế Quốc gia (NIH) yêu cầu tủ an toàn sinh học phải được chứng nhận hàng năm. Các phòng thí nghiệm tiến hành nghiên cứu trong một BSC chưa được chứng nhận phù hợp là vi phạm các nguyên tắc của NIH và có thể bị ảnh hưởng đến nguồn tài trợ của họ. Tiêu chuẩn NSF/ANSI 49 thảo luận về các tiêu chuẩn chứng nhận cần thiết để chứng nhận tủ an toàn sinh học phù hợp:
• Các phòng thí nghiệm được yêu cầu đảm bảo tủ của họ được chứng nhận hàng năm
• Phòng thí nghiệm gọi một công ty chứng nhận được công nhận để thực hiện chứng nhận
• Mỗi PI riêng lẻ chịu trách nhiệm đảm bảo tủ của họ được chứng nhận phù hợp, mặc dù một số DLC có thể lên lịch chứng nhận cho phòng thí nghiệm nghiên cứu của họ
• Chứng nhận hàng năm thường có giá khoảng $125-200

Chứng nhận kiểm tra các thông số sau:

• Các bộ lọc HEPA được thử thách với hạt và mức độ thâm nhập được đo để đảm bảo tính toàn vẹn của bộ lọc
• Tất cả các kiểu luồng không khí và tốc độ dòng chảy đều được kiểm tra và điều chỉnh để đảm bảo chúng đáp ứng các thông số của nhà sản xuất
• Báo động luồng không khí trên tủ kết nối tán được kiểm tra và hiệu chỉnh
• Một số nhà cung cấp đã quen thuộc với khuôn viên MIT và đã được Bộ An toàn Sinh học chấp thuận. Nếu có một nhà cung cấp khác mà bạn đang xem xét, vui lòng liên hệ với nhân viên an toàn sinh học của bạn để được hướng dẫn.

Lịch trình

Khử nhiễm bề mặt các bề mặt làm việc của BSC bằng chất khử trùng thích hợp trước khi sử dụng và sau mỗi thí nghiệm. Các chất khử trùng thích hợp có thể bao gồm:

• Một sản phẩm đã đăng ký EPA như quatricide, PREempt, Lysol professional spray, v.v.
• Có thể sử dụng thuốc tẩy gia dụng 10% (nồng độ cuối cùng >0,5% NaOCl) trên tủ an toàn sinh học nhưng bạn phải luôn tuân theo bước rửa bằng nước vô trùng hoặc ethanol 70% để tránh ăn mòn bề mặt làm việc bằng thép không gỉ
• Ethanol 70% có thể được sử dụng cho công việc vi rút sinh dưỡng hoặc bao bọc nhưng nó có thời gian tiếp xúc hạn chế trong tủ an toàn sinh học do tốc độ dòng khí cao (nó bay hơi nhanh)
• Các vật phẩm được giữ trong BSC có thể là nguồn gây nhiễm bẩn và phải được khử nhiễm bề mặt giữa các thí nghiệm.

Vệ sinh Hàng năm/Nửa năm

Cứ sau 6-12 tháng làm sạch bể chứa bên dưới bề mặt làm việc:

• Giữ BSC chạy và sash ở mức làm việc (8-10 inch) để duy trì ngăn chặn
• Không thò đầu vào trong buồng
• Khử trùng bề mặt làm việc và các mặt trước khi nâng
• Luôn khử trùng bề mặt đáy của bề mặt làm việc trước khi lấy ra khỏi tủ

Lưu ý quan trọng:

• Đây thường là công việc của hai người
• Các tủ mới hơn có thể có các mấu để giữ bề mặt làm việc được nâng cao trong quá trình vệ sinh
• Tủ cũ hơn có thể có chướng ngại vật bạn sẽ cần phải di chuyển xung quanh
• Bề mặt làm việc có thể cần phải được tháo ra khỏi tủ để tiếp cận lưu vực bắt

Sửa chữa

• Các công ty chứng nhận cũng có thể thường xuyên thực hiện sửa chữa trên BSC. Cần phải chứng nhận lại sau bất kỳ sửa chữa nào.

Bộ lọc HEPA

• Có thể kéo dài 5-10 năm hoặc lâu hơn tùy thuộc vào cách sử dụng và điều kiện phòng thí nghiệm (tức là độ ẩm và độ sạch của không khí trong phòng thí nghiệm)
• Các bộ lọc thay thế yêu cầu khử nhiễm toàn bộ khí của BSC trước khi có thể thay thế các bộ lọc và loại bỏ các bộ lọc cũ
• Hầu hết các tủ đều có 2 bộ lọc – nguồn cung cấp và ống xả (một số kiểu tủ có thể có bộ lọc thứ ba)
• Đây thường là một quá trình kéo dài 2 ngày
• Quạt động cơ
• Động cơ quạt gió có thể tồn tại trong một thập kỷ trở lên
• Khi chúng già đi, chúng mất khả năng và phải được thay thế
• Tủ phải được khử nhiễm khí trước khi có thể thay thế động cơ
• Đây thường là một quá trình kéo dài 2 ngày
• Cảm biến, Sash và Điều khiển
• Những bộ phận này có thể hao mòn theo thời gian
• Họ có thể yêu cầu khử nhiễm khí tùy thuộc vào vị trí của bộ phận và liệu nó có thể tiếp xúc với không khí bị ô nhiễm hay không

Khử trùng khí

• Cần phải khử nhiễm khí trước khi thay bộ lọc HEPA, sửa chữa động cơ quạt gió hoặc thải bỏ BSC. Có nhiều phương pháp:

Hydro peroxide hơi (VHP) là phương pháp được ưu tiên:

• Thời gian khử trùng ngắn hơn
• Nói chung là một quá trình qua đêm
• Nguy cơ an toàn hóa chất thấp hơn so với khí formaldehyde
• Tủ được niêm phong trong quá trình khử nhiễm, nhưng phòng thí nghiệm thường không thể tiếp cận trong 8 giờ
• Thông thường chi phí khoảng $500

Khí formaldehyde:

• Thời gian khử nhiễm lâu hơn (thường là 24 giờ)
• Rủi ro an toàn hóa chất cao hơn do
• Gas phải được cọ rửa sau khi khử nhiễm
• Tủ được niêm phong nhưng phòng thí nghiệm không thể tiếp cận trong quá trình khử nhiễm
• Thông thường chi phí khoảng $500

Đèn UV

• Việc sử dụng phương pháp khử trùng bằng tia cực tím đã trở thành một yếu tố truyền thống của công việc nuôi cấy mô vô trùng trong các tủ sinh học sinh học. Tuy nhiên, hướng dẫn hiện tại không khuyến nghị dựa vào khử trùng bằng tia cực tím để đảm bảo khử trùng vì nhiều nghiên cứu đã phát hiện ra rằng các phòng thí nghiệm không bảo trì đèn UV đúng cách và không có tiêu chuẩn thiết lập nào để thử nghiệm đèn UV. Đèn UV không được thử nghiệm trong quá trình chứng nhận hàng năm.

 

MIT Biosafety không khuyến nghị sử dụng đèn UV. Để biết thêm thông tin, xin vui lòng xem các chủ đề dưới đây.

Hạn chế

• Đèn UV chỉ có hiệu quả đối với việc khử trùng bề mặt của các khu vực tiếp xúc với đèn UV. Các khu vực trong bóng tối của thiết bị hoặc bên dưới giấy/nhựa sẽ không được khử nhiễm.

Bóng đèn UV có thời hạn sử dụng hạn chế trước khi chúng mất tác dụng:

• Thời hạn sử dụng trung bình 6-8 tháng
• Ánh sáng sẽ tỏa sáng màu xanh ngay cả sau khi hết hạn
• Hiệu suất chỉ 85% sau 6000 giờ sử dụng

Các hạt có thể tích tụ trên bề mặt của bóng đèn:

• Giảm hiệu quả
• Yêu cầu khử nhiễm bề mặt hàng tuần
• Không có tiêu chuẩn NSF/ANSI để thử nghiệm và chúng không được thử nghiệm trong quá trình chứng nhận BSC hàng năm.

Đèn UV không còn được khuyên dùng bởi:

• Hiệp hội An toàn Sinh học Hoa Kỳ (ABSA International, 2000)
• Tổ chức Vệ sinh Quốc gia (NSF International 2004)
• Trung tâm Kiểm soát và Phòng ngừa Dịch bệnh (CDC , 2009)
• Nghiên cứu cho thấy các phòng thí nghiệm không thay thế và bảo trì bóng đèn thường xuyên, điều này tạo ra cảm giác an toàn sai lầm về tính vô trùng.
• Các tủ mới hơn không được chế tạo với đèn UV và đèn UV phải được thêm vào như một tính năng tùy chỉnh (chi phí bổ sung bắt buộc).
• Sử dụng ánh sáng tia cực tím có thể dẫn đến phơi nhiễm và gây hại khi tiếp xúc với da hoặc mắt.

Hướng dẫn dành cho các phòng thí nghiệm chọn sử dụng đèn UV

• Luôn sử dụng hóa chất khử trùng trước và sau khi sử dụng BSC; Khử trùng bằng tia cực tím không thể được sử dụng làm phương pháp khử trùng chính
• Không sử dụng đèn UV trong khi nghiên cứu đang được thực hiện trong tủ; các tủ mới hơn có khóa liên động ngăn không cho đèn UV kích hoạt khi cửa mở, nhưng các tủ cũ hơn có thể không có tính năng an toàn này

• Giảm thiểu thiết bị được lưu trữ trong BSC để tránh tiếp xúc không cần thiết; Tia UV sẽ làm phân hủy nhựa theo thời gian (chẳng hạn như pipet, thùng chứa chất thải và ống dẫn chân không)

Hầu hết các tác nhân bị bất hoạt sau 10-15 p

Sử dụng thời gian phơi sáng thích hợp

Hút

• Thời gian khử trùng tối đa nên được giới hạn trong 30 phút – sau 30 phút sẽ không có thêm lợi ích nào
• Tắt đèn UV sau thời gian khử trùng để tiết kiệm năng lượng và tuổi thọ của bóng đèn (tính bền vững)

Thông tin bổ sung

Để biết thêm thông tin, vui lòng tham khảo các bài viết sau:

• Hiệp hội An toàn Sinh học Hoa Kỳ (2000). Báo cáo vị trí về việc sử dụng đèn cực tím trong tủ an toàn sinh học
• Burgerner, J. (2006). Báo cáo vị trí về việc sử dụng đèn cực tím trong tủ an toàn sinh học. An toàn sinh học ứng dụng 11 (4): 228–230
• Meechan P, Wilson C (2006). Sử dụng đèn cực tím trong tủ an toàn sinh học: Một quan điểm trái ngược. An toàn sinh học ứng dụng 11 (4): 222–227
• Trung tâm Kiểm soát và Phòng ngừa dịch bệnh; Viện Y tế Quốc gia. An toàn sinh học trong phòng thí nghiệm vi sinh và y sinh. tái bản lần thứ 5 Washington DC. 2009
• NSF Quốc tế (NSF); Viện tiêu chuẩn quốc gia Mỹ (ANSI). Tiêu chuẩn NSF/ANSI 49-2007. Tủ an toàn sinh học cấp II (dòng chảy tầng). Ann Arbor (MI); 2004

Ứng phó khẩn cấp

Tràn trên bề mặt làm việc của tủ an toàn sinh 

• Giữ tủ chạy để chứa sol khí và tuân theo giao thức dọn dẹp tràn sinh học thông thường:
• Giữ tủ chạy
• Đánh giá tình hình và đảm bảo bạn đang mặc PPE phù hợp
• Thu thập bộ dụng cụ chống tràn sinh học của bạn và chất khử trùng thích hợp
• Che vết tràn bằng khăn giấy
• Ngâm khăn giấy với chất khử trùng
• Cho phép thời gian liên lạc 10 phút
• Nhặt khăn giấy và mảnh vụn bằng kẹp và xử lý như rác thải sinh học hoặc mảnh vụn sinh học (đối với bất kỳ mảnh kính vỡ nào)
• Khử trùng bề mặt để loại bỏ mọi vết bẩn còn sót lại và đợi 5-10 phút hoặc cho đến khi không khí khô
• Rửa sạch bằng cồn 70% hoặc nước vô trùng để loại bỏ chất khử trùng còn sót lại (điều này là bắt buộc nếu bạn sử dụng thuốc tẩy 10%)
• Vứt bỏ tất cả khăn giấy như rác thải sinh học, tháo găng tay và rửa tay

Sự cố tràn lớn vào lưu vực Catch

• Giữ tủ chạy
• Đánh giá tình hình và đảm bảo bạn đang mặc PPE phù hợp
• Thu thập bộ dụng cụ chống tràn sinh học của bạn và chất khử trùng thích hợp
• Đảm bảo van xả được đóng
• Đổ chất khử trùng lên bề mặt và qua các vỉ nướng
• Cho phép thời gian tiếp xúc ít nhất 10 phút
• Sử dụng khăn giấy để thấm chất khử trùng còn sót lại trên bề mặt làm việc
• Nhặt khăn giấy và mảnh vụn bằng kẹp và xử lý như rác thải sinh học hoặc mảnh vụn sinh học (đối với bất kỳ mảnh kính vỡ nào)
• Kết nối ống linh hoạt với van xả
• Xả chậu vào thùng chứa đầy chất khử trùng
• Nâng bề mặt làm việc
• Khử trùng bể hứng (xem chi tiết phần bảo trì ở trên) bằng chất khử trùng thích hợp và đợi 5-10 phút
• Rửa sạch bằng cồn 70% hoặc nước vô trùng để loại bỏ chất khử trùng còn sót lại (điều này là bắt buộc nếu bạn sử dụng thuốc tẩy 10%)
• Vứt bỏ tất cả khăn giấy như rác thải sinh học, tháo găng tay và rửa tay

Các thiết bị thông gió khác

• Có nhiều kiểu thiết bị thông gió khác nhau được sử dụng trong các điều kiện khác nhau. Một số cung cấp ngăn chặn, những người khác thì không. Bản chất của vật liệu của bạn và liệu vật liệu đó có cần được xử lý trong môi trường vô trùng hay không sẽ quyết định loại thông gió mà bạn cần. Ngay cả các kiểu BSC khác nhau cũng có thể khác nhau về chức năng và khả năng bảo vệ được cung cấp.

Tủ an toàn sinh học cấp 3 (BSC Class III) – AC3-5B của Esco