Cơ chế phân tách các thành phần bằng HPLC

HPLC viết tắt của cụm từ High Performance Liquid Chromatography system

Đây là một kỹ thuật hóa học phân tích được sử dụng để tách, định lượng và xác định mọi thành phần có trong một hỗn hợp. Kỹ thuật này phụ thuộc vào bơm để đẩy một số dung môi lỏng hạn chế có chứa hỗn hợp mẫu qua cột chứa vật liệu hấp thụ rắn.

Mỗi thành phần trong mẫu sẽ tương tác với vật liệu hấp thụ theo một cách hơi khác nhau. Điều này sẽ gây ra các tốc độ dòng chảy khác nhau trong các thành phần khác nhau do đó làm cho các thành phần tách ra khi chúng chảy ra khỏi cột. Hệ thống sắc ký lỏng hiệu suất cao được sử dụng chủ yếu cho các mục đích sản xuất, y học và nghiên cứu.

Tách bằng HPLC Trong sản xuất, HPLC hầu hết được sử dụng trong quá trình sản xuất các sản phẩm sinh học và dược phẩm. Trong y học, nó được sử dụng để phát hiện mức độ vitamin D trong huyết thanh. Khi nói đến nghiên cứu, HPLC được sử dụng cho một số mục đích. Một ví dụ điển hình là; tách các thành phần trong mẫu sinh học, hầu hết trong số đó là phức tạp.

Sắc ký lỏng hiệu năng cao được sử dụng để tách và tinh chế các hợp chất theo độ phân cực của chúng. Để hiểu về sự phân cực, chúng ta có thể sử dụng một ví dụ đơn giản về dầu, nước và etanol. Etanol có cực. Như vậy nó sẽ trộn đúng với nước. Ngược lại, dầu không phân cực nên không trộn đều với nước.

Cột HPLC cũng được gọi là pha tĩnh. Nó được làm từ các chất khác nhau, chủ yếu là silica, và nó có bản chất rất nhỏ. Các chuỗi carbon dài chức năng hóa các hạt silica. Chuỗi cacbon không phân cực. Vì vậy, chuỗi càng dài, cột sẽ càng trở nên không phân cực. Cột C18 là những cột được sử dụng nhiều nhất và chứa 18 chuỗi cacbon.

Hệ thống sắc ký lỏng hiệu suất cao có thể được sử dụng để tách các hợp chất trong các mẫu môi trường, hóa học y tế, vi sinh và cả các mẫu môi trường. Các hợp chất được bơm vào cột HPLC. Sau đó, pha động, thực tế là hỗn hợp của nước và dung môi hữu cơ sau đó được đưa vào. Dung môi hữu cơ được sử dụng chủ yếu là metanol hoặc axetonitril. Đây được gọi là pha động vì hỗn hợp di chuyển toàn bộ qua cột HPLC và vẫn đồng thời đẩy các hợp chất trong cột ra ngoài. Quá trình xả ra ngoài còn được gọi là rửa giải.

Các hợp chất thường được rửa giải cùng với một nồng độ gradient . Nói một cách đơn giản hơn, lượng nước trong pha động giảm đi sau một thời gian, khi tỷ lệ phần trăm dung môi không phân cực tăng đồng bộ. Các thành phần trong pha động sau đó sẽ trở nên không phân cực hơn. Các hợp chất có trong mẫu được sử dụng sẽ dính vào chuỗi cacbon trong cột. Các hợp chất không phân cực nhất sẽ bám dính mạnh nhất trong khi các hợp chất phân cực nhất sẽ bám yếu.

Về cơ bản, Sắc ký lỏng hiệu suất cao phân tách các thành phần khỏi các hợp chất của chúng theo độ phân cực của chúng. HPLC cũng được sử dụng như một công cụ phân tích để kiểm tra các mẫu môi trường và sinh học về sự hiện diện hoặc thậm chí không có các hợp chất đã biết. Các hợp chất này bao gồm thuốc, chất độc và thuốc trừ sâu. Nó cũng có thể hỗ trợ trong việc xác định các hợp chất chưa biết

Phân loại sắc ký

Sắc ký pha đảo

Công thức tính số đĩa lý thuyết, hiệu suất của cột trong sắc ký lỏng HPLC