Tối đa hóa năng suất của quy trình của bạn với việc lựa chọn kích thước lỗ chính xác

Việc lựa chọn kích thước lỗ của pha tĩnh có tầm quan trọng lớn đối với quá trình tách hiệu quả và do đó đối với các quy trình tinh chế hiệu quả. Kích thước lỗ xác định tổng diện tích bề mặt và mật độ phối tử. Để có kết quả tách tốt nhất, kích thước lỗ nên được lựa chọn theo kích thước của phân tử mục tiêu.

Tương quan giữa kích thước lỗ và diện tích bề mặt của pha tĩnh

Kích thước lỗ của pha tĩnh có mối tương quan trực tiếp với diện tích bề mặt riêng: Lỗ càng nhỏ thì tổng diện tích bề mặt càng lớn. Do đó, tải phối tử cũng cao hơn đối với các lỗ nhỏ hơn vì có thể tiếp cận diện tích bề mặt lớn hơn để sửa đổi. Do đó, tải cacbon của pha RP cao hơn đối với các lỗ nhỏ hơn. Điều này ảnh hưởng đến khả năng tải và hành vi giữ lại của mục tiêu trên pha tĩnh. Khi kích thước lỗ tăng, diện tích bề mặt riêng giảm. Do đó, tải phối tử tổng thể (trong trường hợp này là tải cacbon của pha C18) giảm với các lỗ lớn hơn.

Mối quan hệ giữa kích thước lỗ và kích thước của phân tử mục tiêu

Kích thước lỗ của pha tĩnh có tác động lớn đến quá trình phân tách sắc ký vì điều này phụ thuộc rất nhiều vào kích thước của phân tử mục tiêu phải tiếp cận lỗ. Các phân tử nhỏ có thể dễ dàng tiếp cận lỗ của pha tĩnh này trong khi các phân tử lớn hơn như peptide, protein hoặc polyme lớn bị loại khỏi lỗ. Đối với các loại phân tử này, cần có lỗ lớn hơn. Kích thước lỗ quá nhỏ và quá lớn dẫn đến độ phân giải giảm và độ mở rộng đỉnh. Nhìn chung, kích thước lỗ nên được chọn là nhỏ nhất có thể nhưng phải lớn nhất cần thiết.

Lựa chọn kích thước lỗ dựa trên trọng lượng phân tử

Để phân tách tối ưu, kích thước lỗ phải được điều chỉnh theo trọng lượng phân tử của mục tiêu. Với công cụ lựa chọn YMC, bạn có thể tìm thấy ngay kích thước lỗ phù hợp nhất chỉ trong nháy mắt, tùy thuộc vào kích thước của phân tử mục tiêu. Theo nguyên tắc chung, phân tử mục tiêu càng lớn thì kích thước lỗ của pha tĩnh càng lớn và độ kỵ nước của pha tĩnh càng ít. Tất nhiên, các giá trị này chỉ là khuyến nghị và các giới hạn là hướng dẫn. Do đó, việc thử nghiệm các kích thước lỗ khác nhau với tải trọng tăng lên là hợp lý.

Kết luận

Để xác định pha tĩnh phù hợp nhất, sàng lọc các kích thước lỗ khác nhau với tải trọng mục tiêu tăng lên là một cách tiếp cận rất thành công. Ghi chú kỹ thuật này giúp xác định kích thước lỗ phù hợp nhất dựa trên kích thước của các phân tử mục tiêu và ngoài ra còn đưa ra các ví dụ thực tế cũng như các mẹo để mở rộng quy mô. Tính linh hoạt hoàn toàn với pha tĩnh YMC là một lợi ích bổ sung cho mọi lần sàng lọc: các pha tĩnh để tinh chế chuẩn bị YMC-Triart Prep và YMC*Gel có sẵn ở nhiều kích thước lỗ khác nhau.